Архив в PDF формате
Дата публикации статьи в журнале: 2019/11/13
Название журнала: Восточно Европейский Научный Журнал, Выпуск: 50, Том: 3, Страницы в выпуске: 16-20
Анотация: Одним из новых перспективных направлений молекулярной биотехнологии является бесклеточный синтез белка (БСБ). Процедура БСБ основана на реконструкции in vitro всех этапов биосинтеза белка в клетке, включая транскрипцию, аминоацилирование тРНК и трансляцию мРНК рибосомами. В настоящем исследовании в качестве варианта, альтернативного каноническому глубинному культивированию в ферментере, была изучена возможность синтеза в бактериальной системе БСБ дигуанилатциклазы (ДГЦ) бактерии Thermotoga maritime и двух химерных белков: человеческого анннексина-А5, слитого с аденозиндезаминазой Escherichia coli (А5-АДаза), и модифицированной TaqДНК-полимеразы, слитой с ДНК-аффинным доменом бактерии Sulfolobus solfataricus (Диамант-ДНКполимераза). Для синтеза этих белков использовали S30-клеточный экстракт E. coli, химерную РНКполимеразу бактериофага Т7 и высококопийный плазмидный вектор pET42mut. В результате выполнения работы нами впервые продемонстрирована возможность синтеза данных белков в системе БСБ. При этом в частично оптимизированных условиях проведения процесса получено по 1 мл экспериментальных образцов ДГЦ, А5-АДазы и Диамант-ДНК-полимеразы с активностью 45 Ед/мл, 5 Ед/мл и 250 Ед/мл ферментного препарата, соответственно
Ключевые слова: химерный белок дигуанилатциклаза аннексин-А5 аденозиндезаминаза ДиамантДНК-полимераза Escherichia coli бесклеточный синтез белка высококопиийная плазмида
DOI:
Данные для цитирования: Казловский И.С. Бельская И.В. Булатовский А.Б. . СИНТЕЗ ДИГУАНИЛАТЦИКЛАЗЫ THERMOTOGA MARITIME И ДВУХ ХИМЕРНЫХ БЕЛКОВ, ИСПОЛЬЗУЯ СИСТЕМУ БЕСКЛЕТОЧНОГО СИНТЕЗА БЕЛКА (16-20). Восточно Европейский Научный Журнал. Биологические науки. 2019/11/13; 50(3):16-20.